1. 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光 PCR 仪进行实时荧光检测。
2. 内含的 dUTP-UNG 可防交叉污染。
3. 特异性比 RT-PCR 高，因为 RT-LAMP 扩增使用 4-6 条引物而不是两条。
4. 灵敏性可达 10 拷贝/反应以下（随引物而不同），故假阴性率更低。
只可用于科研，只可进行定性检测，不能用于定量检测
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成 份 |
编号 |
塑料盒包装 |
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MMLV 逆转录酶（含 RI），200U/μL |
60905a |
50 μL（黄盖） |
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4×RT Buffer（含 dNTP） |
60905b |
250 μL（白盖） |
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5×荧光及可视化LAMP MagicMix |
200603a |
200 μL（绿盖） |
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Bst DNA 聚合酶 2.0（8U/uL） |
200403 |
50 uL (红盖) |
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RT-LAMP 阳性对照模板-引物混合物 |
130923a |
20 μL（黄盖） |
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超纯水 |
100935 |
1mL（亮黄盖） |
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使用手册 |
200603sc |
1 份 |
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运输及保存 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。 |
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自备试剂 |
RT-LAMP 模板及 RT-LAMP 引物、PCR 级石蜡油（仅对使用金属浴或水浴者）。 |
准备工作：如果使用水浴锅或金属浴，需要在实验启动前打开并调到 60-65℃。如果用金属浴，还必须在孔中加水以填充金属孔和反应管间的空隙。金属浴和水浴温控远远不如PCR 仪器，所以使用前需要用阳性对照和阴性对照（水）做预实验确认可用。一、样品 RNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼容。
如果有 N 个样品，则至少需要做 N+2 个样品制备，包括一个制备阳性对照（制备时加入自备的跟要检测的靶分子相同的阳性对照模板，一起经历提取过程）和一个制备阴性对照（用水替代样品）。最后 N+2 个样品一起进行 RNA 提取操作，得到 N+2 个 RNA 样品
二、合成 1st-strand cDNA
按下表配制 RT 反应体系:
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成分 |
加入量 |
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自备 RNA 模板总 RNA 或 poly(A) mRNA 或专一的 RNA 注意：RNA 样品不能有基因组 DNA 污染。 |
100-500 ng 10-500 ng 0.01pg-500ng |
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自备引物 F3 |
1 μL |
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4×RT Buffer（含 dNTP） |
5 μL |
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自备 RNase-free 水 |
补水到 19 μL |
4. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
5. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可改成 45℃保温 5 分钟。
6. 加入 1μL (=200 U) MMLV 逆转录酶（含
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